New Tech-ren azido nukleikoak erauzteko eta detektatzeko makina guztiz automatikoa

Bost indarra:
● Azido nukleikoen erauzketa eta araztutako urratsarekin konfiguratutako tresna
● Ultrasoinu-erauzketa-moduluarekin konfiguratutako tresna
● Erabat automatikoki konfiguratutako tresna
● Tenperatura aldakorreko anplifikazioarekin konfiguratutako tresna
● Erabat itxitako erreaktiboen kitarekin konfiguratutako tresna

1. Azido nukleikoak detektatzeko erreaktiboak atera eta araztu behar al dira?
Azido nukleikoaren detekzioaren printzipioa honako hau da: primer-aren eraginez, DNA polimerasa kate-erreakzioaren anplifikazioa egiteko erabiltzen da DNA/RNA txantiloian (NAren alderantzizko transkripzioa behar du), eta, ondoren, askatzen den seinale fluoreszentearen zenbatekoa detektatzen da zehazteko. laginak detektatu nahi den patogenoaren azido nukleikoa (DNA/RNA) duen ala ez.

1) Erauzi edo araztu ez diren laginek azken emaitzan eragina duten osagai asko izan ditzakete: nukleasa (helburuko azido nukleikoa disolbatu eta negatibo faltsua sor dezakeena), proteasa (ADN polimerasa murrizten duena eta negatibo faltsua eragin dezakeena), metal astuna. gatza (sintasa desaktibatzea dakar eta positibo faltsua eragiten duena), PH azidoegia edo alkalinoegia (erreakzioa huts egitea eragin dezakeena), RNA osatugabea (negatibo faltsu alderantzizko transkripzioaren hutsegitea dakar).

2)Lagin batzuk zuzenean anplifikatzen zailak dira: Gram-positiboak eta parasito batzuk, beren zelula-horma lodiak eta bestelako egiturak direla eta, azido nukleikoen erauzketa eta arazteko prozesutik pasatzen ez badira, erauzketarik gabeko kitak huts egin dezake horrelakoetarako. laginak.

Hori dela eta, azido nukleikoen erauzketa urratsarekin konfiguratutako proba-kit edo tresna hautatzea gomendatzen da.

2. Erauzketa kimikoa edo ultrasoinuen zatiketa fisikoaren erauzketa?
Oro har, erauzketa kimikoa aurretratamendu eta arazketa gehienetan aplika daiteke.Hala ere, horma lodiko bakterio Gram-positiboetan eta parasito batzuetan, erauzketa kimikoak ezin dituela azido nukleikoen txantiloi eraginkorrak lor daitezke, negatibo faltsuak hautematea eraginez.Horrez gain, erauzketa kimikoak askotan agente sendoak erabiltzen ditu, eluzioa ez bada sakona, erraza da erreakzio sisteman alkali sendoa sartzea, emaitza okerrak lortuz.

Ultrasoinu-zatiketak birrinketa fisikoa erabiltzen du, GeneXpert-ek arrakastaz erabili du, gizakien erabilerarako POCTren alorreko enpresa liderrak, eta erabateko abantaila du lagin konplexu batzuen (adibidez, Mycobacterium tuberculosis) azido nukleikoen erauzketan.

Horregatik, azido nukleikoen erauzketa-pauso batekin konfiguratutako proba-kit edo tresna bat hautatzea gomendatzen da.eta egokiena da ultrasoinu-erauzketa-modulu bat badago.

3. Eskuzko, erdi-automatikoa eta guztiz automatikoa?
Hau lan kostuaren eta lanaren eraginkortasunaren arazoa da.Gaur egun, langile nahikorik ez duten maskoten ospitaleak, eta azido nukleikoak ateratzea eta detektatzea zenbait trebetasun eta esperientzia eskatzen dituen lana da.Zalantzarik gabe, azido nukleikoak erauzteko eta hautemateko makina guztiz automatikoa aukera ezin hobea da.

4. Tenperatura konstantearen anplifikazioa edo tenperatura aldakorreko anplifikazioa?
Anplifikazio-erreakzioa azido nukleikoa detektatzeko lotura bat da, eta lotura honetan parte hartzen duen teknologia profesionala konplexua da.Gutxi gorabehera, azido nukleikoa handitzeko entzimak erabiltzen dira.Anplifikazio-prozesuan, anplifikatutako fluoreszentzia-seinalea edo txertatutako fluoreszentzia-seinalea detektatzen da.Oro har, fluoreszentzia seinalea zenbat eta lehenago agertu, orduan eta handiagoa izango da laginaren xede-gene-edukia.

Tenperatura konstantearen anplifikazioa azido nukleikoen anplifikazioa da tenperatura finko batean, eta tenperatura aldakorreko anplifikazioa, berriz, desnaturalizazio-anplifikazio-hedapenaren arabera hertsiki anplifikazio ziklikoa da.Tenperatura konstantearen anplifikazio-denbora burutu da, eta tenperatura aldakorreko anplifikazio-denbora, berriz, tresnaren tenperatura igoeraren eta jaitsieraren tasak eragin handia du (gaur egun, fabrikatzaile askok 40 anplifikazio-ziklo egin ahal izan dituzte 30 bat minututan).

Laborategiko baldintzak onak badira eta zonifikazioa zorrotza bada, arrazoizkoa da bien arteko zehaztasun-aldea ez dela handia izango.Hala ere, tenperatura aldakorreko anplifikazioak azido nukleiko produktu gehiago sintetizatuko ditu denbora nahiko laburragoan.Zonifikazio zorrotzik eta prestakuntza profesionaleko langilerik ez duten laborategietan, azido nukleikoen aerosol-ihesaren arriskua handiagoa izango da, positibo faltsuak isurketak gertatzen direnean gertatzen dira eta oso zaila da ezabatzea.

Horrez gain, tenperatura konstantearen anplifikazioak ere anplifikazio ez-espezifikoa izateko joera handiagoa du lagina konplexua denean (erreakzio-tenperatura erlatiboa baxuagoa da, eta zenbat eta hedapen-tenperatura handiagoa izan, orduan eta hobeto lotzeko espezifikotasuna).

Gaur egungo teknologiari dagokionez, tenperatura aldakorreko anplifikazioa fidagarriagoa da.

5. Nola saihestu azido nukleikoen anplifikazio produktuen isurketa arriskua?
Gaur egun, fabrikatzaile askok guruin motako PCR hodi hautatzen dute azido nukleikoko erreakzio hodi gisa, marruskaduraz zigilatua, eta tenperatura desnaturalizazioa tenperatura aldakorreko PCR anplifikazioan 90 gradura iristen da.
zentigradoa .Beroarekin hedatzeko eta hotzarekin uzkurtzeko errepikatutako prozesua erronka handia da PCR hodiaren zigilatzeko, eta guruin motako PCR hodia nahiko erraza da isurketak eragitea.

Hobe da erreakzioa guztiz itxita dagoen kit/hodi batekin hartzea, erreakzio-produktuaren ihesa saihesteko.Ezin hobea izango litzateke azido nukleikoak erauzteko eta detektatzeko guztiz itxitako kit bat lantzea.

Beraz, New Tech-ren azido nukleikoak erauzteko eta detektatzeko makina guztiz automatikoak goiko bost aukera optimoak ditu.